PDLIM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405340

概要

PDLIM5は、PDZ-LIMドメインをもつ足場タンパク質をコードしており、アクチンに富む構造に局在して、接着斑やストレスファイバーに沿って細胞骨格の構築をシグナル伝達複合体と結び付けます。PDLIM5は、キナーゼやアクチン関連因子との相互作用を介して、メカノトランスダクション（機械刺激の情報変換）、細胞接着と遊走、さらに細胞形態や力の伝達に影響する収縮要素の配置・組織化に寄与します。興奮性組織では、PDLIM5が神経および心筋における細胞骨格シグナルの制御や、シナプス／収縮装置のリモデリングに関与することが示唆されています。PDLIM5の発現変動や遺伝的多型は、神経精神疾患関連の表現型や心疾患病態の研究で報告されており、疾患関連モデルにおいて細胞骨格と連動したシグナル伝達ネットワークを調べるうえで重要な標的であることを支持しています。

PDLIM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDLIM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDLIM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDLIM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDLIM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDLIM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDLIM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDLIM5の機能に不可欠なPDLIM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDLIM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDLIM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDLIM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDLIM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDLIM5 HDRプラスミド（h）および PDLIM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDLIM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDLIM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。