PDLIM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405340

Panoramica

PDLIM5 codifica una proteina scaffold con domini PDZ-LIM che si localizza in strutture ricche di actina e collega l’architettura del citoscheletro ai complessi di segnalazione nelle adesioni focali e lungo le fibre di stress. Attraverso interazioni con chinasi e partner associati all’actina, PDLIM5 contribuisce alla meccanotrasduzione, all’adesione e migrazione cellulare e all’organizzazione di elementi contrattili che influenzano la morfologia cellulare e la trasmissione delle forze. Nei tessuti eccitabili, PDLIM5 è stato associato alla regolazione della segnalazione citoscheletrica neuronale e cardiaca e al rimodellamento sinaptico o contrattile. Un’espressione alterata di PDLIM5 o varianti genetiche sono state riportate in studi su fenotipi neuropsichiatrici e patologie cardiache, a supporto della sua rilevanza per investigare reti di segnalazione accoppiate al citoscheletro in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDLIM5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDLIM5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDLIM5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDLIM5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDLIM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDLIM5 per lo studio della segnalazione di PDLIM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDLIM5 critici per la funzione di PDLIM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDLIM5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDLIM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDLIM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDLIM5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDLIM5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDLIM5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDLIM5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDLIM5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.