PDI Plasmide Double Nickase (h): sc-400676-NIC

Il gene umano **P4HB** codifica la **protein disulfide isomerase (PDI)**, un’ossidoreduttasi e chaperone multifunzionale che catalizza la formazione, la riduzione e l’isomerizzazione dei legami disolfuro durante il ripiegamento delle proteine nel reticolo endoplasmatico. La PDI sostiene la proteostasi del RE attraverso la risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response) e la degradazione associata al RE (ER-associated degradation), e partecipa anche alla segnalazione redox tramite reazioni di scambio tiolo–disolfuro. Un’attività deregolata di P4HB/PDI è stata collegata ad alterazioni delle risposte cellulari allo stress, a cambiamenti nella capacità della via secretoria e a uno squilibrio della proteostasi osservato in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia del cancro e modelli di neurodegenerazione. In quanto componente centrale del ripiegamento ossidativo delle proteine, la PDI è spesso studiata in vie che regolano la maturazione proteica, la secrezione e l’omeostasi redox.

PDI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P4HB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P4HB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P4HB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P4HB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.