Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) PDH-E1α: sc-401044-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PDH-E1α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PDH-E1α (h) y el plásmido de doble nickasa PDH-E1α (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PDHA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDH-E1α Anticuerpo (D-6): sc-377092
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PDH-E1α | sc-401044-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PDH-E1α | sc-401044-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDHA1 codifica la subunidad E1α del complejo piruvato deshidrogenasa (PDH), que cataliza la descarboxilación oxidativa del piruvato para generar acetil‑CoA y conectar la glucólisis con el ciclo del ácido tricarboxílico. La actividad de la PDH‑E1α sostiene la respiración mitocondrial, regula el flujo de carbono hacia la biosíntesis de lípidos e influye en el equilibrio redox mediante la producción posterior de NADH. PDHA1 está regulado por quinasas y fosfatasas de la PDH que ajustan la actividad del complejo PDH en respuesta a la disponibilidad de nutrientes y a la demanda energética celular. La alteración de la función de PDHA1 se asocia con remodelación metabólica y disfunción mitocondrial, y se estudia en contextos como la acidosis láctica, fenotipos del neurodesarrollo y cambios en la bioenergética en modelos de enfermedades proliferativas.
PDH-E1α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDHA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDHA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDHA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDHA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.