PDE7B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411961-ACT

Il gene umano **PDE7B** codifica la fosfodiesterasi 7B, una fosfodiesterasi specifica per il cAMP che idrolizza l’AMP ciclico in 5′-AMP, modulando così ampiezza e durata della segnalazione intracellulare mediata dal cAMP. Controllando vie dipendenti dal cAMP, come la trascrizione mediata da PKA/CREB e la modulazione a valle dei programmi di segnalazione immunitari e neuronali, PDE7B contribuisce alla regolazione dell’attivazione, della differenziazione e della sopravvivenza cellulare. L’espressione e l’attività di PDE7B sono state collegate a reti di segnalazione infiammatorie e a processi rilevanti per la neurobiologia, rendendola un nodo utile per studiare la compartimentalizzazione del cAMP e l’integrazione dei segnali. Alterazioni della segnalazione associata a PDE7B sono state riportate in contesti pertinenti a disfunzioni immunitarie e a fenotipi legati al SNC, a supporto del suo studio come modulatore di via nei modelli di malattia.

PDE7B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDE7B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDE7B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDE7B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDE7B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDE7B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDE7B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDE7B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDE7B nelle cellule tumorali con espressione di PDE7B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.