PDCD1LG2/PD-L2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404344-ACT

PDCD1LG2 (PD-L2) è un ligando immunoregolatorio della famiglia B7 che si lega a PD-1 (PDCD1) sulle cellule T per modulare l’attivazione antigene-specifica, la produzione di citochine e la tolleranza periferica. La sua espressione sulle cellule presentanti l’antigene e la sua espressione inducibile nei tessuti infiammati integrano segnali provenienti da programmi trascrizionali guidati dall’interferone e dall’infiammazione, che plasmano il priming delle cellule T e la funzione effettrice. PD-L2 contribuisce alla segnalazione dei checkpoint immunitari e può influenzare l’equilibrio tra attivazione e soppressione immunitaria nei microambienti linfatici e tissutali. Un’espressione deregolata di PDCD1LG2 è stata associata ad alterazioni dell’immunità antitumorale, a fenotipi di infezioni croniche e a stati infiammatori correlati all’autoimmunità, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione immunitaria.

PDCD1LG2/PD-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDCD1LG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDCD1LG2/PD-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDCD1LG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDCD1LG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDCD1LG2/PD-L2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDCD1LG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDCD1LG2/PD-L2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDCD1LG2/PD-L2 nelle cellule tumorali con espressione di PDCD1LG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.