Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Pdcd-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422150-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pdcd-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Pdcd-1 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Pdcd-1 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Pdcd-1 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Pdcd1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Pdcd-1 Antibody (RMP1-30): sc-56200
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pdcd-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-422150-ACT | 20 µg | $397.00 |
La proteina 1 della morte cellulare programmata (Pdcd1; PD-1) è un recettore inibitorio espresso prevalentemente sui linfociti T attivati, sui linfociti B e su popolazioni mieloidi, dove limita la segnalazione del recettore per l’antigene e riduce la differenziazione effettrice. L’attivazione di PD-1 avvia una segnalazione basata sul motivo di switch tirosinico (ITSM) che recluta fosfatasi come SHP2, attenuando le vie prossimali del TCR/CD28, incluse PI3K–AKT e RAS–MAPK, per modulare produzione di citochine, proliferazione e idoneità metabolica. Pdcd1 è un regolatore chiave della tolleranza periferica e dell’omeostasi immunitaria, e la sua espressione sostenuta è associata a programmi di esaurimento dei linfociti T durante l’infiammazione cronica e l’esposizione persistente all’antigene. Nei modelli murini, la dinamica di espressione di Pdcd1 è ampiamente utilizzata per studiare la regolazione immunitaria in contesti quali infezioni, autoimmunità e immunologia dei tumori.
Pdcd-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pdcd1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Pdcd-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pdcd1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pdcd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pdcd-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pdcd1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pdcd-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pdcd-1 nelle cellule tumorali con espressione di Pdcd1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.