Plásmido Doble Nickase (h) PCIF1: sc-407384-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PCIF1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PCIF1 (h) y el plásmido de doble nickasa PCIF1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PCIF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PCIF1 Anticuerpo (A-9): sc-374406
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PCIF1 | sc-407384-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PCIF1 | sc-407384-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCIF1 (factor 1 que interactúa con el CTD fosforilado) es una metiltransferasa asociada al cap del ARNm que cataliza la N6‑metilación de la 2′‑O‑metiladenosina en el primer nucleótido transcrito (m6Am) adyacente al cap m7G, configurando el panorama de modificaciones de ARN próximas al cap. Mediante esta actividad, PCIF1 influye en la estabilidad del ARNm, la eficiencia de traducción y programas de expresión génica específicos de transcritos que se intersectan con el procesamiento de ARN y la regulación epitranscriptómica. La m6Am dependiente de PCIF1 se ha vinculado a la modulación de respuestas celulares al estrés y de salidas de señalización del desarrollo y proliferativas a través del control postranscripcional. La desregulación de la metilación próxima al cap y de la expresión de PCIF1 se ha investigado en contextos que incluyen la biología tumoral y la expresión génica relacionada con la inmunidad, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por modificaciones del ARN.
PCIF1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PCIF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PCIF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PCIF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PCIF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.