PCGF3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405260

Panoramica

PCGF3 (polycomb group ring finger 3) è un componente centrale del complesso repressivo Polycomb 1 (PRC1) non canonico e funziona come ligasi E3 dell’ubiquitina in collaborazione con RING1A/RING1B per catalizzare la monoubiquitinazione dell’istone H2A (H2AK119ub). Attraverso questa attività, PCGF3 contribuisce alla repressione trascrizionale mediata da Polycomb, alla memoria epigenetica e alla compattazione della cromatina, che aiutano a coordinare i programmi di espressione genica dello sviluppo e le decisioni sul destino cellulare. I complessi PRC1 contenenti PCGF3 si intersecano con reti più ampie di regolazione della cromatina, incluso l’equilibrio Polycomb/Trithorax e il crosstalk con la metilazione di H3K27 dipendente da PRC2. La disregolazione del segnale Polycomb e della composizione delle subunità di PRC1 è spesso implicata nel silenziamento genico aberrante e nella riprogrammazione trascrizionale osservati nel cancro e in altri disturbi di origine epigenetica, motivando studi meccanicistici della funzione di PCGF3 nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCGF3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCGF3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCGF3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCGF3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCGF3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCGF3 per lo studio della segnalazione di PCGF3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCGF3 critici per la funzione di PCGF3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCGF3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PCGF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCGF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCGF3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PCGF3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCGF3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCGF3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCGF3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.