Plásmido CRISPR de Activación (h) PCDH8: sc-405324-ACT

PCDH8 (protocadherina 8) es una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas que contribuye a la arquitectura tisular y a la señalización intercelular en células humanas. Al modular la dinámica de adhesión y la comunicación dependiente del contacto, PCDH8 influye en procesos como la polaridad celular, la migración y la diferenciación, con efectos posteriores sobre la organización del citoesqueleto y la remodelación de las uniones celulares. Los patrones desregulados de expresión de protocadherinas se han asociado con adhesión alterada y fenotipos invasivos en biología del cáncer, y PCDH8 se investiga con frecuencia en el contexto de la regulación epigenética y el control transcripcional. Como parte de redes más amplias de cadherinas/protocadherinas, PCDH8 constituye un nodo manejable para desentrañar mecanismos que acoplan la adhesión en la superficie celular con programas de regulación génica.

PCDH8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCDH8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PCDH8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCDH8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCDH8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PCDH8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCDH8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PCDH8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PCDH8 en células tumorales con expresión de PCDH8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.