PCDH20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406005-ACT

PCDH20 codifica la protocaderina-20, una proteina di adesione cellula–cellula calcio-dipendente che contribuisce all’architettura tissutale e alla segnalazione in contesti epiteliali e neurali. In quanto parte della superfamiglia delle protocaderine/caderine, PCDH20 influenza la comunicazione mediata dal contatto, l’organizzazione del citoscheletro e processi legati alla polarità e alla motilità cellulare. Un’alterata espressione di PCDH20 è stata riportata in molteplici tumori, nei quali cambiamenti nei programmi di adesione e nella segnalazione associata possono incidere sull’invasione e sul potenziale metastatico. Poiché le molecole di adesione interagiscono con vie come Wnt/β-catenina e altre reti di segnalazione giunzionale, PCDH20 è spesso studiata per il suo ruolo nella differenziazione, nella biologia tumorale e nelle interazioni con il microambiente.

PCDH20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PCDH20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PCDH20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PCDH20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PCDH20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PCDH20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PCDH20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PCDH20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PCDH20 nelle cellule tumorali con espressione di PCDH20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.