Pax-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422119

Panoramica

Il gene Pax6 del topo codifica il fattore di trascrizione Pax-6 contenente il paired box, un regolatore maestro dello sviluppo dell’occhio e del sistema nervoso centrale che controlla la specificazione di linea, la neurogenesi e il patterning dei tessuti. Pax-6 si lega a elementi enhancer per coordinare programmi di espressione genica che governano proliferazione e differenziamento dei progenitori, integrandosi con reti di segnalazione dello sviluppo che includono le vie Wnt, SHH e FGF. Nei tessuti maturi, Pax-6 contribuisce al mantenimento dell’identità neuronale e alla regolazione genica endocrina del pancreas, supportando l’omeostasi del glucosio. Un’attività o un dosaggio di Pax6 deregolati sono fortemente associati a malformazioni oculari congenite e a fenotipi neuroevolutivi, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici dei circuiti regolatori genici dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pax6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pax6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pax6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pax6 per lo studio della segnalazione di Pax-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pax6 critici per la funzione di Pax-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pax6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pax-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pax-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pax6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pax-6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pax6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pax6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.