Pax Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402171-ACT

PAX2 codifica o fator de transcrição Pax2 (paired box), um regulador de ligação ao DNA específico de sequência essencial para o padrão embrionário e a especificação de linhagens, particularmente durante o desenvolvimento do rim, do trato urogenital, do olho e do sistema nervoso central. Pax2 coordena programas gênicos que controlam a diferenciação epitelial, a sobrevivência celular e a morfogênese por meio de redes transcricionais que se cruzam com vias de sinalização do desenvolvimento, como WNT, FGF e NOTCH. A expressão desregulada ou mutações em PAX2 têm sido associadas a anomalias congênitas do rim e do trato urinário e a distúrbios do desenvolvimento ocular, e a atividade alterada de Pax2 também é estudada em contextos de proliferação aberrante e plasticidade de linhagem. Como regulador do desenvolvimento, PAX2 é amplamente utilizado como marcador e nó funcional em modelos de nefrogênese, sistemas de organoides e estudos de identidade epitelial.

Pax-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-2 em células tumorais com expressão de PAX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.