PAWP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406196

Panoramica

WBP2NL codifica PAWP (proteina postacrosomiale legante il dominio WW), un fattore di origine spermatica arricchito nella guaina postacrosomiale che contribuisce all’attivazione dell’ovocita al momento della fecondazione. PAWP contiene motivi PPXY che interagiscono con adattatori di segnalazione contenenti domini WW, collegandola a reti regolatorie dipendenti dalla fosforilazione implicate nelle oscillazioni precoci del calcio embrionale e nella ripresa del ciclo cellulare. Studi funzionali associano un’espressione o un’attività alterata di PAWP a una fecondazione compromessa, a uno sviluppo embrionale anomalo e ad alcune forme di infertilità maschile. In quanto regolatore specifico delle cellule germinali, WBP2NL rappresenta un modello maneggevole per analizzare la segnalazione spermatozoo–ovocita, il controllo qualità dei gameti e l’interazione tra vie della riproduzione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAWP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WBP2NL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WBP2NL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WBP2NL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAWP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WBP2NL per lo studio della segnalazione di PAWP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WBP2NL critici per la funzione di PAWP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WBP2NL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAWP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAWP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WBP2NL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAWP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAWP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WBP2NL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WBP2NL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.