parvalbumin α Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401364-LAC

PVALB codifica la parvalbumina α, una proteina legante il calcio ad alta affinità con domini EF-hand che tampona il Ca²⁺ intracellulare e modella ampiezza e cinetica dei transienti di calcio. Nelle cellule eccitabili, la parvalbumina contribuisce alla segnalazione dipendente dal calcio, influenzando processi come il rilascio di neurotrasmettitori accoppiato al potenziale d’azione e la regolazione genica dipendente dall’attività. È ampiamente utilizzata come marcatore molecolare di popolazioni di interneuroni GABAergici a scarica rapida ed è spesso studiata nel contesto della dinamica dei circuiti neuronali e dell’omeostasi del calcio. Un’espressione deregolata di PVALB o un’alterazione della funzione degli interneuroni parvalbumina-positivi è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, motivando studi meccanicistici sull’equilibrio eccitazione–inibizione e sulle vie regolata dal Ca²⁺.

Le particelle di attivazione lentivirale parvalbumin α (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PVALB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale parvalbumin α (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PVALB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di parvalbumin α. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PVALB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.