PARP-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406615

Panoramica

PARP4 codifica il membro 4 della famiglia delle poli(ADP-ribosio) polimerasi (PARP-4), un’ADP-ribosiltransferasi associata alle risposte cellulari al danno al DNA e allo stress genotossico. PARP-4 è coinvolta nella regolazione della dinamica della cromatina e nel mantenimento dell’integrità del genoma tramite una segnalazione dipendente dalla poli(ADP-ribosil)azione che interagisce con le vie di riparo del DNA e con i checkpoint. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di PARP4 sono state riportate in diversi dataset legati al cancro, a supporto della sua rilevanza nello studio della tolleranza al danno al DNA associata ai tumori e dell’adattamento allo stress. PARP-4 è inoltre utilizzata come nodo meccanicistico per indagare il cross-talk tra ADP-ribosilazione, stress replicativo e regolazione trascrizionale nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PARP-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PARP4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PARP4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PARP4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PARP-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PARP4 per lo studio della segnalazione di PARP-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PARP4 critici per la funzione di PARP-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PARP4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PARP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PARP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PARP4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PARP-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PARP-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PARP4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PARP4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.