PARP-14 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402812-ACT

PARP14 umano (PARP-14; ARTD8) è una mono-ADP-ribosiltransferasi che catalizza l’ADP-ribosilazione di proteine bersaglio per modulare programmi trascrizionali, la trasduzione del segnale e le interazioni proteina–proteina. Agisce in contesti sia nucleari sia citoplasmatici, integrando segnali derivanti dalla comunicazione citochinica e dalle risposte allo stress per influenzare la differenziazione delle cellule immunitarie, l’espressione di geni infiammatori e la regolazione metabolica. PARP-14 è stata collegata al controllo trascrizionale dipendente da STAT, a vie associate all’interferone e alla regolazione di complessi associati a RNA e cromatina. Un’attività o un’espressione di PARP14 deregolate sono state associate ad alterazioni della segnalazione immunitaria e sono state studiate nel contesto di infiammazione, fibrosi e biologia tumorale come nodo di connessione tra risposte citochiniche e output trascrizionale.

PARP-14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PARP14 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PARP-14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PARP14 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PARP14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PARP-14. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PARP14 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PARP-14 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PARP-14 nelle cellule tumorali con espressione di PARP14 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.