Parkin Plasmide Double Nickase (m): sc-424514-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Parkin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Parkin Double Nickase Plasmid (m) e il Parkin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Park2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Parkin Antibody (PRK8): sc-32282
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Parkin Plasmide Double Nickase (m) | sc-424514-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Park2 codifica l’E3 ubiquitina ligasi Parkin, un regolatore centrale del controllo qualità mitocondriale che collabora con PINK1 per marcare i mitocondri danneggiati e indirizzarli alla mitofagia ubiquitina-dipendente. L’ubiquitinazione mediata da Parkin delle proteine della membrana mitocondriale esterna modula il turnover proteasomiale, la dinamica mitocondriale e la segnalazione responsiva allo stress che influenza l’omeostasi bioenergetica. Grazie a queste funzioni, Park2 è ampiamente utilizzato per studiare le vie che collegano stress ossidativo, disfunzione mitocondriale e proteostasi in sistemi neuronali e non neuronali. La disregolazione dell’attività di Parkin è fortemente associata a meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione, in particolare ai processi implicati in fenotipi parkinsoniani.
Parkin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Park2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Park2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Park2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Park2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.