PARG Plasmide Double Nickase (h): sc-404382-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PARG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PARG Double Nickase Plasmid (h) e il PARG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PARG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PARG Antibody (H-1): sc-398563
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PARG Plasmide Double Nickase (h) | sc-404382-NIC | 20 µg | $410.00 |
La poli(ADP-ribosio) glico-idrolasi (PARG) è il principale enzima che idrolizza le catene di poli(ADP-ribosio) (PAR), controbilanciando la PARilazione dipendente da PARP durante la risposta al danno al DNA. Controllando il turnover del PAR, PARG modella la dinamica della cromatina, le risposte allo stress replicativo e la risoluzione degli assemblaggi di segnalazione dipendenti dal PAR che si formano in corrispondenza delle lesioni del DNA. L’attività di PARG interseca vie che regolano la riparazione delle rotture a singolo filamento, la stabilità delle forcelle di replicazione e l’integrità del genoma, e un metabolismo del PAR alterato è stato collegato a fenotipi di riparazione del DNA associati ai tumori e a risposte allo stress rilevanti per la neurodegenerazione. In quanto regolatore centrale dell’omeostasi della PARilazione, PARG è ampiamente utilizzato come nodo per analizzare l’architettura funzionale della via PARP–PARG e i meccanismi di reclutamento proteico guidati dal PAR.
PARG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PARG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PARG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PARG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PARG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.