PARD6G Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403179-ACT

PARD6G codifica una proteina scaffold umana della famiglia PAR-6 che partecipa al complesso di polarità apicale insieme a PAR3 e alla PKC atipica, coordinando l’instaurazione e il mantenimento della polarità delle cellule epiteliali. Attraverso interazioni che influenzano l’assemblaggio delle tight junctions, l’organizzazione del citoscheletro e la divisione cellulare asimmetrica, PARD6G contribuisce a un’architettura tissutale regolata e a un comportamento cellulare direzionale. Alterazioni delle vie della polarità possono compromettere l’integrità delle giunzioni e le reti di segnalazione che controllano proliferazione e differenziamento, rendendo PARD6G rilevante per studi sull’organizzazione dell’epitelio e sui fenotipi associati alla trasformazione. La regolazione alterata dei componenti del complesso PAR è inoltre oggetto di studio in contesti quali la biologia della migrazione e dell’invasione, in cui il rimodellamento della polarità si intreccia con le Rho GTPasi e con la segnalazione giunzionale.

PARD6G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PARD6G senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PARD6G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PARD6G nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PARD6G, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PARD6G. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PARD6G nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PARD6G nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PARD6G nelle cellule tumorali con espressione di PARD6G silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.