Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PARD6B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425492
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PARD6B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PARD6B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PARD6B Antibody (B-10): sc-166405
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PARD6B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425492 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pard6b codifica PARD6B, un componente essenziale del complesso di polarità PAR che coopera con PRKCZ/PRKCI e PARD3 per stabilire la polarità apico-basale e organizzare le giunzioni epiteliali. Attraverso l’interazione con CDC42 e la regolazione del citoscheletro di actina, PARD6B influenza l’assemblaggio delle tight junctions, la divisione cellulare asimmetrica e la migrazione direzionale durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. L’alterazione della segnalazione del complesso PAR è ampiamente associata a difetti della funzione di barriera epiteliale e a una morfogenesi deregolata, processi frequentemente modificati nei modelli di progressione tumorale e metastasi. Nei sistemi murini, Pard6b viene comunemente studiato nel contesto della segnalazione dipendente dalla polarità, del rimodellamento giunzionale e della specificazione di linea cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PARD6B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pard6b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pard6b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pard6b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PARD6B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pard6b per lo studio della segnalazione di PARD6B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pard6b critici per la funzione di PARD6B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pard6b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PARD6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PARD6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pard6b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PARD6B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PARD6B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pard6b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pard6b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.