Parafibromin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401334-ACT

CDC73 codifica a parafibromina, um supressor tumoral nuclear que atua como componente central do complexo regulatório transcricional PAF1, coordenando o alongamento da RNA polimerase II e o controle gênico associado à cromatina. A parafibromina contribui para a regulação epigenética e para o controle do ciclo celular ao influenciar modificações de histonas e programas transcricionais ligados à proliferação e à diferenciação. Por meio dessas funções, o CDC73 ajuda a manter a estabilidade genômica e um nível equilibrado de atividade transcricional em múltiplos contextos de sinalização, incluindo vias que interagem com a expressão gênica responsiva à Wnt/β-catenina. A ruptura da função de CDC73 está associada a neoplasias endócrinas e relacionadas às paratireoides e a uma desregulação mais ampla do controle do crescimento, tornando-o um alvo valioso para estudos mecanísticos em biologia do câncer e regulação transcricional.

Parafibromin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC73 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Parafibromin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC73 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC73, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Parafibromin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC73 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Parafibromin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Parafibromin em células tumorais com expressão de CDC73 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.