PAR-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-417018-NIC

F2RL2 codifica il recettore attivato da proteasi 3 (PAR-3), un recettore accoppiato a proteine G sensibile alla trombina che modula la segnalazione piastrinica e le risposte delle cellule vascolari attraverso un’attivazione proteolitica regolata. PAR-3 influenza le vie emostatiche e infiammatorie plasmando le reti di segnalazione a valle dei GPCR, inclusa la mobilizzazione del calcio e le cascate di chinasi che si intersecano con l’attivazione cellulare guidata dalla coagulazione. Nell’uomo, alterazioni nella segnalazione della famiglia PAR sono state associate a trombosi disregolata, infiammazione vascolare e interazioni tumore–stroma, rendendo F2RL2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione mediata da proteasi. L’analisi della funzione di PAR-3 supporta l’indagine del cross-talk tra proteasi, GPCR e segnali della matrice extracellulare in microambienti rilevanti per la patologia.

PAR-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F2RL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F2RL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F2RL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F2RL2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.