PAPP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406222

Visão geral

PAPPA codifica a proteína plasmática A associada à gravidez (PAPP-A), uma metaloproteinase secretada da família das pappalisinas que regula a biodisponibilidade do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF) ao clivar proteínas de ligação ao IGF, particularmente IGFBP4 e IGFBP5. Ao aumentar o IGF livre local, a PAPP-A modula vias de sinalização conduzidas por IGF1R, como PI3K–AKT e MAPK/ERK, influenciando a proliferação, a diferenciação e a sobrevivência celular em contextos de remodelação tecidual. A atividade da PAPP-A também está ligada à proteólise próxima à matriz extracelular e à regulação parácrina da sinalização de fatores de crescimento em microambientes vasculares e estromais. A expressão ou atividade desregulada de PAPPA tem sido associada à biologia placentária, à biologia de placas ateroscleróticas e a fenótipos cardiometabólicos inflamatórios, motivando estudos mecanísticos do controle do eixo IGF em tipos celulares relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PAPPA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PAPPA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PAPPA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAPP-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PAPPA para a investigação da sinalização de PAPP-A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PAPPA críticos para a função PAPP-A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PAPPA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAPP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PAPP-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PAPPA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAPP-A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PAPP-A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PAPPA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PAPPA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.