Pannexin-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-424967-LAC

Panx1 codifica la pannessina-1, un canale di membrana plasmatica ampiamente espresso che consente il rilascio regolato di ATP e di altre piccole molecole a supporto della segnalazione paracrina. L’attività della pannessina-1 si integra con le vie recettoriali purinergiche (P2X/P2Y) per modulare il flusso di calcio, la segnalazione associata all’inflammasoma e risposte cellulari coordinate durante stress, stimolazione meccanica e morte cellulare. Nei sistemi murini, Panx1 è stato implicato nella modulazione del reclutamento delle cellule immunitarie e delle reti di citochine, nonché nella regolazione della comunicazione tra neuroni e glia tramite segnalazione da nucleotidi extracellulari. La disfunzione del canale PANX1 e le alterate dinamiche di rilascio di ATP sono frequentemente studiate in contesti quali neuroinfiammazione, dolore neuropatico, risposte al danno ischemico e interazioni tumore–sistema immunitario, come bersagli di ricerca meccanicistica.

Le particelle di attivazione lentivirale Pannexin-1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Panx1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pannexin-1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Panx1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pannexin-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Panx1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.