palladin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-428317-KO-2

Panoramica

Il gene murino **Palld** codifica la palladina, una proteina scaffold associata all’actina che coordina l’organizzazione del citoscheletro legandosi ai regolatori dell’actina e collegando tra loro componenti presenti nelle fibre di stress, nelle adesioni focali e in altri complessi di adesione. La palladina contribuisce al controllo della forma cellulare, alla maturazione delle adesioni e alla migrazione direzionale, integrando segnali delle GTPasi della famiglia Rho e delle vie che regolano la contrattilità actomiosinica e le interazioni con la matrice extracellulare. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione della palladina sono state associate a rimodellamento tissutale anomalo e a fenotipi invasivi in contesti rilevanti per il cancro, rendendo **Palld** un nodo utile per lo studio della disregolazione del citoscheletro. Nel sistema murino, la perturbazione di **Palld** è comunemente utilizzata per chiarire i meccanismi di motilità, meccanotrasduzione e segnalazione dipendente dall’adesione in modelli di sviluppo e di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO palladin (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Palld in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Palld insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Palld a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina palladin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Palld per lo studio della segnalazione di palladin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Palld critici per la funzione di palladin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Palld per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal palladin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal palladin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Palld. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal palladin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR palladin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Palld per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Palld definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.