PAK5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404073

Panoramica

PAK5 (p21-activated kinase 5) è una chinasi serina/treonina attivata a valle delle GTPasi della famiglia Rho, come Cdc42 e Rac, che integra segnali in grado di regolare il rimodellamento del citoscheletro, la crescita dei neuriti e la sopravvivenza cellulare. Si localizza nei mitocondri e in altri compartimenti subcellulari, dove può influenzare la segnalazione correlata all’apoptosi e le risposte allo stress. PAK5 partecipa a vie che governano motilità e polarità cellulari attraverso la fosforilazione di intermedi del citoscheletro e della segnalazione, collegando stimoli extracellulari a cambiamenti di adesione e migrazione. Un’attività o un’espressione disregolata di PAK5 è stata associata a fenotipi di proliferazione anomala, invasione e resistenza alle terapie in molteplici contesti oncologici ed è rilevante anche in neurobiologia per i suoi ruoli nello sviluppo neuronale e nella funzione sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAK5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAK5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAK5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAK5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAK5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAK5 per lo studio della segnalazione di PAK5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAK5 critici per la funzione di PAK5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAK5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAK5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAK5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAK5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAK5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAK5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.