PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422104
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PAFAH1B3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PAFAH1B3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PAFAH1B3: sc-81950
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422104 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Pafah1b3 kodiert die katalytische Untereinheit PAFAH1B3, eine serinabhängige Phospholipase, die den Thrombozyten-aktivierenden Faktor (platelet-activating factor) und verwandte bioaktive Phospholipide hydrolysiert. Durch die Modulation lipidischer Second Messenger trägt PAFAH1B3 zur Membranhomöostase bei und beeinflusst nachgeschaltete inflammatorische Signalwege, Stressantworten und Stoffwechsel-Remodeling-Programme. Eine veränderte PAFAH1B3-Aktivität wurde mit Verschiebungen in der zellulären Lipidzusammensetzung und proliferationsassoziierten Programmen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für Studien zum Krebszellstoffwechsel und zur Immunregulation unterstreicht. In Mausmodellen bietet Pafah1b3 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um den Phospholipidabbau und dessen Auswirkungen auf die Gewebephysiologie sowie krankheitsassoziierte Lipidsignale zu untersuchen.
Das PAFAH1B3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pafah1b3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pafah1b3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pafah1b3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAFAH1B3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pafah1b3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAFAH1B3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Pafah1b3-Exone abzielen, die für die PAFAH1B3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pafah1b3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PAFAH1B3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAFAH1B3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pafah1b3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAFAH1B3 HDR-Plasmid (m) und PAFAH1B3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pafah1b3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pafah1b3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.