PAF acetylhydrolase 2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410924-LAC

PAFAH2 codifica a acetil-hidrolase 2 do fator ativador de plaquetas (PAF-AH2), uma fosfolipase intracelular que hidrolisa o grupo acetil sn-2 do fator ativador de plaquetas e de fosfolipídios oxidados relacionados, modulando assim a disponibilidade de mediadores lipídicos e a homeostase dos lipídios de membrana. Ao limitar espécies bioativas do tipo PAF, a PAFAH2 influencia a sinalização inflamatória, as respostas ao estresse oxidativo e processos a jusante, como a produção de citocinas, a apoptose e a adaptação celular ao estresse. Alterações no processamento de fosfolipídios oxidados e na sinalização por PAF têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e a contextos de lesão tecidual, tornando a PAFAH2 um alvo útil para estudar a sinalização dirigida por lipídios e vias reguladas por mecanismos redox. A modulação experimental de PAFAH2 dá suporte a estudos mecanísticos em imunologia, biologia vascular e modelos de estresse metabólico, nos quais o turnover de fosfolipídios impacta a função celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais PAF acetylhydrolase 2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PAFAH2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PAF acetylhydrolase 2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PAFAH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PAF acetylhydrolase 2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PAFAH2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.