PAF acetylhydrolase 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410924-LAC

PAFAH2 codifica la platelet-activating factor acetylhydrolase 2 (PAF-AH2), una fosfolipasi intracellulare che idrolizza il gruppo acetile in sn-2 del fattore attivante le piastrine (PAF) e di fosfolipidi ossidati correlati, modulando così la disponibilità di mediatori lipidici e l’omeostasi dei lipidi di membrana. Limitando le specie bioattive di tipo PAF, PAFAH2 influenza la segnalazione infiammatoria, le risposte allo stress ossidativo e processi a valle quali la produzione di citochine, l’apoptosi e l’adattamento cellulare allo stress. Un’alterata gestione dei fosfolipidi ossidati e della segnalazione del PAF è stata associata a fenotipi infiammatori e a contesti di danno tissutale, rendendo PAFAH2 un nodo utile per studiare la segnalazione guidata dai lipidi e le vie regolata dal redox. La modulazione sperimentale di PAFAH2 supporta studi meccanicistici in immunologia, biologia vascolare e modelli di stress metabolico, in cui il turnover dei fosfolipidi influisce sulla funzione cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale PAF acetylhydrolase 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PAFAH2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PAF acetylhydrolase 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PAFAH2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PAF acetylhydrolase 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PAFAH2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.