PABPC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422101

Panoramica

Pabpc2 codifica la poly(A)-binding protein citoplasmatica 2 (PABPC2), un fattore legante l’RNA che si associa alle code poli(A) per coordinare la stabilità dell’mRNA, l’efficienza di traduzione e il turnover attraverso interazioni con i complessi di inizio della traduzione e con il macchinario di degradazione dell’mRNA. Nell’ambito della regolazione genica post-trascrizionale, PABPC2 contribuisce al controllo dinamico dei programmi di espressione genica durante le risposte allo stress cellulare, la differenziazione e i processi di sviluppo nel topo. Un’alterata regolazione della coda poli(A) e il rimodellamento citoplasmatico degli mRNP sono ampiamente associati a una proteostasi deregolata e a un metabolismo dell’RNA aberrante, caratteristiche comuni in modelli di neurodegenerazione, biologia del cancro e segnalazione immunitaria. Pabpc2 rappresenta quindi un nodo utile per interrogare le vie che collegano le decisioni sul destino dell’mRNA al fenotipo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PABPC2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pabpc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pabpc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pabpc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PABPC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pabpc2 per lo studio della segnalazione di PABPC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pabpc2 critici per la funzione di PABPC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pabpc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PABPC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PABPC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pabpc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PABPC2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PABPC2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pabpc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pabpc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.