PABP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422100

Panoramica

Il gene murino Pabpc1 codifica la poly(A)-binding protein (PABP), un regolatore centrale del destino degli mRNA citoplasmatici che si lega alle code poly(A) e coordina l’inizio della traduzione, la stabilizzazione dell’mRNA e il turnover dipendente dalla deadenilazione. Attraverso interazioni con eIF4G e altre proteine leganti l’RNA, PABP contribuisce ad accoppiare la lunghezza della coda poly(A) al reclutamento dei ribosomi e sostiene una sintesi proteica efficiente durante crescita, differenziamento e risposte allo stress. PABP partecipa inoltre a programmi di controllo post-trascrizionale coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, nell’apoptosi e nelle risposte antivirali innate, rendendo Pabpc1 un nodo rilevante negli studi sulla disregolazione dell’espressione genica. La perturbazione delle reti di regolazione dell’mRNA dipendenti da PABP è spesso esaminata nel contesto di programmi traduttivi oncogenici e di fenotipi neuroevolutivi o neurodegenerativi guidati da un metabolismo dell’RNA alterato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PABP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pabpc1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pabpc1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pabpc1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PABP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pabpc1 per lo studio della segnalazione di PABP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pabpc1 critici per la funzione di PABP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pabpc1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pabpc1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PABP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PABP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pabpc1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pabpc1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.