p57 Kip2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400444

Panoramica

CDKN1C codifica p57 Kip2, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti (CDK) della famiglia CIP/KIP che limita l’attività delle CDK per imporre l’arresto del ciclo cellulare in G1 e sostenere la differenziazione terminale. p57 Kip2 integra segnali di sviluppo e di controllo della crescita attraverso la regolazione dei complessi Ciclina–CDK e il collegamento con i checkpoint che coordinano la proliferazione con la specificazione di linea. Il gene è imprintato e sensibile al dosaggio, rendendo la sua espressione strettamente regolata durante l’embriogenesi, nella biologia placentare e nell’omeostasi dei tessuti. La disregolazione di CDKN1C è associata a disturbi della crescita legati all’imprinting ed è stata studiata in contesti in cui un controllo alterato del ciclo cellulare e della differenziazione contribuisce a fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p57 Kip2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDKN1C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDKN1C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDKN1C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p57 Kip2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDKN1C per lo studio della segnalazione di p57 Kip2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDKN1C critici per la funzione di p57 Kip2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDKN1C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal p57 Kip2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDKN1C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p57 Kip2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR p57 Kip2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDKN1C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDKN1C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.