Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p53R2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402192
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p53R2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico p53R2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p53R2 Antibody (H-3): sc-137173
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p53R2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402192 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RRM2B codifica p53R2, una piccola subunità della ribonucleotide reduttasi inducibile da p53 che fornisce deossiribonucleotidi per la sintesi e la riparazione del DNA, in particolare in condizioni di stress. p53R2 supporta il mantenimento del DNA mitocondriale e contribuisce all’equilibrio redox e alla sopravvivenza cellulare durante lo stress replicativo, mantenendo adeguati pool di dNTP. Dal punto di vista funzionale, collega la risposta al danno del DNA, la segnalazione di p53 e il metabolismo dei nucleotidi, influenzando la stabilità genomica e il controllo dei checkpoint. La disregolazione di RRM2B è stata associata a fenotipi di deplezione del DNA mitocondriale e all’adattamento allo stress correlato al cancro, rendendolo rilevante per studi sul mantenimento genomico e sulla riprogrammazione metabolica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p53R2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RRM2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RRM2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RRM2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p53R2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RRM2B per lo studio della segnalazione di p53R2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RRM2B critici per la funzione di p53R2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RRM2B per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal p53R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal p53R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RRM2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal p53R2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR p53R2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RRM2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RRM2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.