P4HA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405566

Panoramica

P4HA2 codifica la subunità catalitica alfa-2 della prolil 4-idrossilasi, un enzima chiave del reticolo endoplasmatico necessario per l’idrossilazione dei residui di prolina nel collagene e in altre proteine della matrice extracellulare. Questa modifica post-traduzionale favorisce il corretto ripiegamento e la stabilità della tripla elica, collegando l’attività di P4HA2 alla biosintesi del collagene, al controllo qualità delle proteine nel RE e all’organizzazione della matrice extracellulare. Attraverso il suo ruolo nella deposizione e nel rimodellamento della matrice, P4HA2 è spesso studiato in vie legate alle interazioni cellula–matrice, alla rigidità tissutale e alla regolazione del comportamento cellulare da parte del microambiente. Un’espressione deregolata di P4HA2 è stata associata al rimodellamento fibrotico e a cambiamenti dello stroma associati ai tumori, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici su fenotipi guidati dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P4HA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P4HA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P4HA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P4HA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P4HA2 per lo studio della segnalazione di P4HA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P4HA2 critici per la funzione di P4HA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P4HA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P4HA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P4HA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P4HA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P4HA2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P4HA2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P4HA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P4HA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.