P4HA1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407173

Panoramica

P4HA1 codifica la subunità alfa catalitica della prolil 4-idrossilasi, un enzima chiave residente nel RE che idrossila i residui di prolina nel procollagene, favorendo la stabilità della tripla elica e la maturazione della matrice extracellulare. Regolando la biosintesi e la deposizione del collagene, P4HA1 influenza il rimodellamento della matrice, l’adesione cellula–matrice e la rigidità tissutale, processi che si intrecciano con programmi responsivi all’ipossia e con l’adattamento metabolico. Un’alterata attività di P4HA1 è stata associata a fenotipi fibrotici e al rimodellamento del microambiente tumorale, in cui l’organizzazione della matrice extracellulare può influenzare l’invasione e la segnalazione stromale. Di conseguenza, P4HA1 è spesso studiato in vie legate alla fibrillogenesi del collagene, alla processazione delle proteine nel RE e alla regolazione del comportamento cellulare guidata dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P4HA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P4HA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P4HA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P4HA1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P4HA1 per lo studio della segnalazione di P4HA1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P4HA1 critici per la funzione di P4HA1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P4HA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P4HA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P4HA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P4HA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P4HA1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P4HA1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P4HA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P4HA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.