p41-ARCb Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419207

Panoramica

Arpc1b codifica p41-ARCb, una subunità regolatoria del complesso Arp2/3 che avvia la nucleazione di reti di actina ramificate, necessarie per un rimodellamento dinamico del citoscheletro. Nelle cellule murine, p41-ARCb sostiene processi quali la formazione di lamellipodi, la migrazione cellulare, l’endocitosi e le funzioni effettrici delle cellule immunitarie coordinando la polimerizzazione dell’actina a valle delle GTPasi della famiglia Rho e dei fattori che promuovono la nucleazione. L’assemblaggio dell’actina dipendente da Arp2/3 si integra con vie di segnalazione che controllano adesione, traffico vescicolare e organizzazione della sinapsi immunologica. Un’attività deregolata di ARPC1B/Arp2/3 è associata a difetti nel comportamento delle cellule ematopoietiche e immunitarie ed è rilevante per lo studio, in vivo e in vitro, di fenotipi simili a immunodeficienza e di meccanismi infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p41-ARCb (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Arpc1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Arpc1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Arpc1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p41-ARCb.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Arpc1b per lo studio della segnalazione di p41-ARCb, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Arpc1b critici per la funzione di p41-ARCb
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Arpc1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p41-ARCb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal p41-ARCb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Arpc1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p41-ARCb Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR p41-ARCb (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Arpc1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Arpc1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.