p39 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403667-ACT

Il gene umano **CDK5R2** codifica p39, una subunità regolatoria neuronale che attiva la chinasi ciclina‑dipendente 5 (CDK5) e contribuisce a indirizzarne la localizzazione subcellulare e la specificità per i substrati. Il complesso CDK5–p39 partecipa alla differenziazione neuronale, al rimodellamento del citoscheletro, alla crescita dei neuriti, alla funzione sinaptica e alla segnalazione dipendente dall’attività, attraverso reti di fosforilazione che si intersecano con le vie MAPK e con percorsi regolati dal calcio. p39 è arricchita nel sistema nervoso e sostiene un controllo coordinato della dinamica dei microtubuli e del traffico vescicolare durante lo sviluppo cerebrale e la plasticità. In ambito di ricerca, uno squilibrio nella regolazione dei cofattori di CDK5, inclusi cambiamenti nell’espressione o nel processamento di CDK5R2, è stato associato a meccanismi di malattie neurodegenerative e del neurosviluppo.

p39 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDK5R2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p39 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDK5R2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDK5R2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p39. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDK5R2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p39 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p39 nelle cellule tumorali con espressione di CDK5R2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.