p38 alpha MAPK14 Plasmide Double Nickase (m): sc-424051-NIC

Il gene murino Mapk14 codifica p38α (MAPK14), una chinasi serina/treonina attivata dallo stress che integra citochine infiammatorie, stress ossidativo e stimoli ambientali per modulare le risposte cellulari. p38α agisce nella cascata di segnalazione MAPK, regolando programmi di fosforilazione che controllano trascrizione, stabilità dell’mRNA, apoptosi, differenziamento e checkpoint del ciclo cellulare attraverso bersagli a valle quali MAPKAPK2/3 e fattori di trascrizione tra cui ATF2 e CREB. Nei compartimenti immunitari e stromali, MAPK14 contribuisce alla produzione di citochine e alla segnalazione dell’immunità innata, collegando le risposte allo stress cellulare all’omeostasi tissutale. Un’attività di p38α deregolata è stata implicata nella fisiopatologia associata all’infiammazione, nei processi neuroinfiammatori e nella biologia del microambiente tumorale, a sostegno del suo impiego in studi meccanicistici in diversi modelli murini di malattia.

p38 alpha MAPK14 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mapk14 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mapk14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mapk14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mapk14 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.