Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p300 Plasmide Double Nickase (m): sc-435902-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p300 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p300 Double Nickase Plasmid (m) e il p300 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ep300. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p300 Antibody (F-4): sc-48343
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p300 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435902-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p300 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435902-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ep300 codifica p300, un’ampia lisina acetiltransferasi e coattivatore trascrizionale che acetila istoni e substrati non istonici, plasmando l’accessibilità della cromatina e i programmi di espressione genica. p300 integra segnali provenienti da molteplici fattori di trascrizione e contribuisce alla funzione degli enhancer, al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e alla differenziazione specifica di linea. Attraverso la modulazione di reti trascrizionali dipendenti dall’acetilazione, p300 influenza vie come le risposte allo stress regolate da p53, la segnalazione TGF-β/SMAD e la regolazione dei geni infiammatori. Un’attività deregolata di EP300 è stata associata a stati epigenetici alterati e a rimodellamento trascrizionale osservati in diversi contesti rilevanti per la malattia, tra cui oncologia, disturbi dello sviluppo e disfunzioni immunitarie.
p300 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ep300 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ep300. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ep300. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ep300 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.