P2Y9 Plasmide Double Nickase (m): sc-429620-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y9 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y9 Double Nickase Plasmid (m) e il P2Y9 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lpar4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y9 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429620-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Lpar4** codifica il recettore dell’acido lisofosfatidico **P2Y9**, un GPCR che accoppia i segnali extracellulari dell’LPA alle proteine G eterotrimeriche, regolando cascate di secondi messaggeri quali l’attivazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione del calcio intracellulare e la segnalazione MAPK/ERK. Attraverso queste vie, P2Y9 influenza la migrazione cellulare, il rimodellamento del citoscheletro, la proliferazione e i programmi di sopravvivenza che modellano lo sviluppo dei tessuti e le risposte infiammatorie. La segnalazione LPA–LPAR4 interagisce anche con l’attività delle GTPasi della famiglia Rho e può modulare i livelli di cAMP a seconda del contesto cellulare, collegando l’attivazione del recettore a cambiamenti trascrizionali e metabolici più ampi. La deregolazione della segnalazione dei recettori dell’LPA è stata associata a fibrosi, disfunzioni immunitarie e fenotipi correlati ai tumori, rendendo **Lpar4** un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della segnalazione guidata dal microambiente.
P2Y9 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lpar4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lpar4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lpar4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lpar4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.