P2Y6 Double Nickase Plasmid (h): sc-402587-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das P2Y6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- P2Y6 Double-Nickase-Plasmid (h) und P2Y6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf P2RY6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P2Y6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
P2RY6 kodiert den menschlichen P2Y6-Rezeptor, einen G‑Protein‑gekoppelten purinergen Rezeptor, der vor allem durch extrazelluläres UDP aktiviert wird und an die Gq/11‑Signalübertragung koppelt. Die Stimulation von P2Y6 fördert die Aktivierung der Phospholipase C, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+, PKC‑Signalwege sowie nachgeschaltete, MAPK/NF‑κB‑verknüpfte transkriptionelle Antworten, die die Zytokinfreisetzung, Phagozytose und den epithelialen Ionentransport mitprägen. Dieser Rezeptor ist an der angeborenen Immunantwort und an Gewebeentzündungen in den Atemwegen, im Gefäßsystem und im Gastrointestinaltrakt beteiligt; seine Fehlregulation wird mit entzündlichen und fibrotischen Prozessen sowie mit tumorspezifischer Signalgebung im Mikromilieu in Verbindung gebracht. Als Oberflächenrezeptor, der nukleotidvermittelte Gefahrensignale integriert, wird P2Y6 häufig in Signalwegen untersucht, die purinerge Signalgebung mit Immunaktivierung und Barrierefunktion verknüpfen.
P2Y6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2RY6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2RY6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2RY6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2RY6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.