P2Y5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405189

Panoramica

LPAR6 (nota anche come P2Y5) codifica un recettore accoppiato a proteine G che risponde all’acido lisofosfatidico, regolando la segnalazione intracellulare tramite proteine G eterotrimeriche. L’attività di P2Y5 influenza le vie collegate a Rho/ROCK e MAPK, coordinando in modo dipendente dal contesto il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellula‑cellula e la motilità. Il recettore è fortemente implicato nella biologia della cute e dei follicoli piliferi, dove alterazioni della segnalazione di LPAR6 sono associate a disturbi congeniti della crescita dei capelli e a fenotipi più ampi legati all’omeostasi epiteliale. Inoltre, la segnalazione lipidica mediata da LPAR6 si intreccia con processi infiammatori e legati alla funzione di barriera, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in cheratinociti e in altri modelli epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LPAR6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LPAR6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LPAR6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LPAR6 per lo studio della segnalazione di P2Y5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LPAR6 critici per la funzione di P2Y5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LPAR6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P2Y5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LPAR6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P2Y5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LPAR6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LPAR6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.