P2Y4 Plasmide Double Nickase (m): sc-425395-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y4 Double Nickase Plasmid (m) e il P2Y4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2ry4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425395-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2ry4 codifica il recettore murino P2Y4, un recettore purinergico accoppiato a proteina G (GPCR) attivato da nucleotidi extracellulari che si accoppia prevalentemente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C. La mobilizzazione del calcio a valle e le vie dipendenti da PKC collegano P2Y4 alla regolazione del trasporto ionico epiteliale, della secrezione mucosale e della contrattilità della muscolatura liscia, con ruoli aggiuntivi nella segnalazione delle cellule immunitarie e nell’omeostasi tissutale. La segnalazione purinergica mediata da GPCR interagisce con cascate infiammatorie, funzione di barriera e risposte allo stress metabolico, rendendo P2ry4 un bersaglio rilevante per studiare la comunicazione guidata dai nucleotidi nella biologia delle vie aeree, dell’apparato gastrointestinale e del sistema vascolare. Un’attività deregolata dei recettori P2Y è stata associata a fenotipi infiammatori e fibrotici in molteplici sistemi d’organo, a supporto di indagini meccanicistiche di P2ry4 in modelli rilevanti per la malattia.
P2Y4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2ry4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2ry4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2ry4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2ry4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.