P2Y2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422096-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y2 Double Nickase Plasmid (m) e il P2Y2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2ry2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: P2Y2 Antibody (H-5): sc-518121
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **P2ry2** codifica il recettore **P2Y2**, un recettore purinergico accoppiato a proteine G (GPCR) attivato da **ATP** e **UTP** extracellulari, che si associa principalmente a **Gq/11** per stimolare la **fosfolipasi C**, la mobilizzazione del calcio **dipendente da IP3** e la segnalazione **PKC/MAPK**. P2Y2 regola il trasporto epiteliale di ioni e fluidi, la clearance mucociliare e la meccanotrasduzione, e modula il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e la produzione di citochine in molteplici tessuti. Attraverso queste vie, P2Y2 contribuisce alla segnalazione dell’immunità innata e alle risposte infiammatorie, con rilevanza per la ricerca in biologia delle vie aeree, rimodellamento vascolare e modelli di danno tissutale e riparazione. La segnalazione purinergica deregolata che coinvolge P2Y2 è stata studiata anche in contesti di infiammazione cronica e fibrosi, nonché nel microambiente tumorale e nei processi metastatici in sistemi sperimentali.
P2Y2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2ry2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2ry2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2ry2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2ry2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.