P2Y2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422096

Panoramica

P2ry2 codifica il recettore murino P2Y2, un recettore purinergico accoppiato a proteine G attivato da ATP e UTP extracellulari. La segnalazione di P2Y2 si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la fosfolipasi C, la produzione di fosfati dell’inositolo, la mobilizzazione di Ca²⁺ intracellulare e l’attivazione a valle delle vie MAPK e PI3K/AKT, modellando risposte trascrizionali e del citoscheletro. Attraverso la regolazione del trasporto ionico, della chemiotassi e della secrezione, P2Y2 contribuisce alla fisiologia della barriera epiteliale, alle risposte endoteliali e alla segnalazione dell’immunità innata in microambienti infiammatori. Una segnalazione purinergica deregolata che coinvolge P2Y2 è stata associata a infiammazione delle vie aeree e dell’intestino, rimodellamento legato alla fibrosi e interazioni stromali e immunitarie associate ai tumori, a supporto della sua rilevanza negli studi sui meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P2ry2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P2ry2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P2ry2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P2ry2 per lo studio della segnalazione di P2Y2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P2ry2 critici per la funzione di P2Y2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P2ry2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal P2Y2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P2ry2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR P2Y2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P2ry2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P2ry2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.