P2Y11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405745

Panoramica

P2RY11 codifica il recettore umano P2Y11, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) sensibile ad ATP/UTP che, in modo peculiare, si accoppia sia alla segnalazione mediata da Gq sia a quella mediata da Gs. In risposta alla stimolazione da parte di nucleotidi extracellulari, P2Y11 promuove l’attivazione della fosfolipasi C con mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e aumenta i livelli di cAMP, integrando gli input purinergici con le vie MAPK/ERK e con altri pathway di secondi messaggeri che modulano l’attivazione delle cellule immunitarie e i programmi citochinici. P2Y11 è espresso in diverse popolazioni di leucociti ed è implicato nella regolazione delle risposte di cellule dendritiche, monociti e linfociti T all’interno di microambienti infiammatori. Una segnalazione purinergica deregolata che coinvolge P2Y11 è stata associata a fenotipi infiammatori e autoimmuni, a supporto del suo studio in modelli di immunometabolismo, neuroinfiammazione e interazione tumore–sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P2RY11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P2RY11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P2RY11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P2RY11 per lo studio della segnalazione di P2Y11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P2RY11 critici per la funzione di P2Y11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P2RY11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P2Y11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P2RY11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P2Y11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P2RY11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P2RY11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.