P2Y1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401759

Panoramica

P2RY1 codifica il recettore umano P2Y1, un recettore purinergico accoppiato a proteine G (GPCR) attivato principalmente dall’ADP extracellulare, che avvia la segnalazione Gq/PLCβ, la mobilizzazione di Ca2+ mediata da IP3 e le risposte a valle delle vie PKC/MAPK. P2Y1 contribuisce alla regolazione dell’attivazione e aggregazione piastrinica, del tono vascolare e della comunicazione intercellulare in contesti endoteliali e immuno-correlati attraverso il rilevamento dei nucleotidi. Nel sistema nervoso, la segnalazione di P2Y1 può modulare l’attività gliale e la dinamica delle reti sinaptiche, collegando segnali purinergici a processi infiammatori e neuromodulatori. Un’attività deregolata di P2RY1 è stata associata a fenotipi trombotici e cardiovascolari ed è studiata anche nel più ampio contesto della neuroinfiammazione e della segnalazione nel microambiente tumorale, dove i nucleotidi extracellulari influenzano il comportamento cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P2RY1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P2RY1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P2RY1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P2RY1 per lo studio della segnalazione di P2Y1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P2RY1 critici per la funzione di P2Y1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P2RY1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P2Y1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P2RY1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P2Y1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P2RY1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P2RY1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.