P2X4 Plasmide Double Nickase (m): sc-422092-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2X4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2X4 Double Nickase Plasmid (m) e il P2X4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2rx4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: P2X4 Antibody (D-3): sc-518167
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2X4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2X4 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **P2rx4** codifica il canale cationico P2X4 attivato dall’ATP, un canale ionico ligando-dipendente che media un rapido ingresso di Na⁺ e Ca²⁺ in risposta all’ATP extracellulare. P2X4 contribuisce alla segnalazione purinergica che modula l’eccitabilità di membrana, le vie intracellulari dipendenti dal calcio e le risposte a valle di chinasi e di trascrizione in tipi cellulari immunitari e neurali. È associato all’attivazione microgliale e alla segnalazione neuroinfiammatoria ed è stato studiato in contesti che includono i meccanismi del dolore neuropatico, la modulazione sinaptica, la regolazione vascolare e le risposte infiammatorie. Queste caratteristiche biologiche rendono **P2rx4** un bersaglio utile per investigare la comunicazione cellulare guidata dall’ATP e le reti di segnalazione calcio-dipendenti in modelli murini.
P2X4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2rx4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2rx4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2rx4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2rx4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.