p19 INK4D/CDKN2D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401761

Panoramica

CDKN2D codifica p19 INK4D, un membro della famiglia INK4 di inibitori delle chinasi ciclina-dipendenti che limita selettivamente l’attività di CDK4/6 per mantenere RB1 in uno stato ipofosforilato e ridurre la progressione del ciclo cellulare dalla fase G1 alla fase S. Modulando la segnalazione ciclina D–CDK, p19 INK4D contribuisce al controllo dei checkpoint, alla tempistica della proliferazione e ai programmi di differenziamento cellulare in molteplici contesti tissutali. L’alterazione di questa via è spesso associata a un ingresso deregolato nel ciclo cellulare e a difetti nel mantenimento del genoma, rilevanti per la biologia del cancro e altri disturbi proliferativi. CDKN2D è quindi ampiamente utilizzato come nodo per studiare la regolazione dell’asse CDK4/6–RB, stati simili alla senescenza e il controllo della crescita in risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p19 INK4D/CDKN2D (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDKN2D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDKN2D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDKN2D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p19 INK4D/CDKN2D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDKN2D per lo studio della segnalazione di p19 INK4D/CDKN2D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDKN2D critici per la funzione di p19 INK4D/CDKN2D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDKN2D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDKN2D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p19 INK4D/CDKN2D Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR p19 INK4D/CDKN2D (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDKN2D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDKN2D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.