P-Selectin/CD62P/SELP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400441

Panoramica

SELP codifica la P-selectina (CD62P), un recettore di adesione inducibile immagazzinato nei granuli α delle piastrine e nei corpi di Weibel–Palade delle cellule endoteliali, ed esposto rapidamente sulla superficie cellulare in seguito a stimoli infiammatori o trombotici. La P-selectina di superficie si lega a PSGL-1 sui leucociti, mediando l’ancoraggio iniziale e il rotolamento sull’endotelio attivato e le interazioni piastrina–leucocita, collegando le dinamiche di adesione a segnali a valle che supportano il reclutamento leucocitario e l’infiammazione vascolare. Questo asse interseca le cascate di adesione mediate dalle selectine, l’attivazione piastrinica e le vie infiammatorie associate alla coagulazione, modulando l’attivazione endoteliale e il traffico delle cellule immunitarie. Un’espressione o attività dis-regolata di SELP è spesso studiata in modelli di trombosi, aterosclerosi, danno da ischemia-riperfusione e disturbi infiammatori, in cui il crosstalk tra piastrine, endotelio e leucociti contribuisce alla patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P-Selectin/CD62P/SELP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SELP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SELP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SELP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P-Selectin/CD62P/SELP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SELP per lo studio della segnalazione di P-Selectin/CD62P/SELP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SELP critici per la funzione di P-Selectin/CD62P/SELP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SELP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SELP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P-Selectin/CD62P/SELP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P-Selectin/CD62P/SELP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SELP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SELP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.