Plásmido CRISPR de Activación (m) Oxr1: sc-431284-ACT

Oxr1 (oxidation resistance 1) en ratón codifica una proteína sensible al estrés que favorece la resiliencia neuronal y celular frente al daño oxidativo al modular la homeostasis redox y preservar la integridad del genoma. Oxr1 está implicado en la función mitocondrial, la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno y las vías de respuesta al daño del ADN que influyen en la supervivencia celular bajo estrés metabólico o ambiental. La alteración de la expresión de Oxr1 se ha asociado con fenotipos relevantes para la neurodegeneración y con una mayor sensibilidad a la lesión oxidativa, lo que la hace útil para estudiar mecanismos de mantenimiento neuronal y adaptación al estrés. Como regulador de la tolerancia al estrés oxidativo, Oxr1 constituye un nodo manejable para desentrañar la comunicación cruzada entre la disfunción mitocondrial, la señalización de daño del ADN y la proteostasis.

Oxr1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Oxr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Oxr1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Oxr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Oxr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Oxr1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Oxr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Oxr1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Oxr1 en células tumorales con expresión de Oxr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.